含发夹结构的Gateway质粒DNA测序方法改进

• 作者: 刘耘 杨利国 熊家军
• 来源期刊: 华中农业大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: Gateway克隆系统 DNA测序 发夹 高温预变性
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 441-444
• 页数: 4页
• 分类号: Q785
• 字数: 3281字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-2421.2008.04.001

摘要

Gateway克隆技术现已广泛用于cDNA文库构建.然而,用常规DNA测序程序对Gateway cDNA进行测序时,反向重复的att序列易形成发夹结构,导致测序质量较差,且测得的序列较短,成为Gateway克隆技术应用的限制因素.本研究报道了1种Gateway cDNA克隆高温变性测序方法,即在Gateway cDNA测序PCR反应之前,先将DNA在98℃预变性5 min,可有效防止测序峰值的快速下降,极显著地增加Gateway cDNA克隆测序长度(质量Q≥20的序列平均长度从528 bp提高到816 bp).该方法在常规DNA测序程序的基础上仅新增了5 min的高温预变性,不增加任何实验成本和操作步骤,非常适合Gateway质粒DNA的大规模测序.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘耘	华中农业大学动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室	21	176	7.0	13.0
2	熊家军	华中农业大学动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室	33	102	6.0	8.0
3	杨利国	华中农业大学动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室	212	1759	21.0	29.0