RNAi-DNA表达载体的构建与应用

• 作者: 叶荻庆 张鹏辉 邹麟
• 来源期刊: 重庆医学
• 学科: 生物学
• 关键词: siRNA DNA表达载体 构建 应用
• 年，卷（期）: 2005,（9）
• 所属期刊栏目: 临床研究
• 页码范围: 1392-1394
• 页数: 3页
• 分类号: Q782
• 字数: 2500字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2005.09.049

摘要

目的构建siRNA的DNA表达载体,为研究RNAi在哺乳动物内抑制靶基因表达奠定基础.方法合成含靶向EGFP基因的siRNA转录模板的发夹结构,将载体质粒pTZU6 +1用Sal I + Xba I进行双酶切后,T4DNA连接酶连接成重组质粒,转染到肝癌SMMC-7721细胞中进行表达,检测转染前后EGFP表达的变化.结果重组质粒在大肠杆菌菌株JM109内扩增.提纯、纯化后用HindⅢ、EcoRI酶切鉴定及测序鉴定证明EGFP-siRNA转录模板完整、正确的插入到pTZU6+1质粒中,并在mRNA和蛋白水平抑制了肝癌SMMC-7721细胞中的EGFP表达.结论成功构建了siRNA的DNA表达载体,并初步应用于靶基因的抑制.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张鹏辉	重庆医科大学医学检验系	18	158	5.0	12.0
2	叶荻庆	重庆医科大学附属第一医院检验科	13	55	4.0	6.0
3	邹麟	重庆医科大学附属第一医院检验科	25	84	6.0	7.0