RNAi-DNA稳定表达载体的构建与应用

• 作者: 周唏 张鹏辉
• 来源期刊: 现代医药卫生
• 学科: 医学
• 关键词: siRNA DNA稳定表达载体 构建 应用
• 年，卷（期）: 2005,（24）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 3355-3357
• 页数: 3页
• 分类号: R37
• 字数: 2829字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-5519.2005.24.001

摘要

目的:构建siRNA的DNA稳定表达载体,为研究RNAi在哺乳动物内持续、稳定抑制靶基因表达奠定基础.方法:合成含靶向hTERT基因的siRNA转录模板的发夹结构,将载体质粒pGenesil-1用BamH1+HindⅢ进行双酶切后,T4DNA连接酶连接成重组质粒,转染到肝癌SMMC-7721细胞中进行稳定筛选、表达,检测稳定筛选前后hTERT基因表达变化.结果:重组质粒在大肠杆菌菌株JM109内扩增.提纯、纯化后用HindⅢ、EcoRI酶切鉴定及测序鉴定证明hTERT-siRNA转录模板完整、正确的插入到pGenesil-1质粒中,建立了稳定抑制hTERT基因的SMMC-7721细胞株,并在mRNA水平抑制了肝癌SMMC-7721细胞hTERT基因表达.结论:成功构建了siRNA-DNA稳定表达载体,能在哺乳动物细胞中表达,并初步应用于靶基因的抑制.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张鹏辉	重庆医科大学医学检验系	18	158	5.0	12.0
2	周唏	重庆医科大学附属第一医院眼科	3	14	2.0	3.0