MDA-7基因的腺病毒载体构建及对肿瘤细胞凋亡的影响

• 作者: 孙丽君 方琳 曹祥荣 江淑芳 浦颖艳 王艳 胡晓翠 苏长青 邱红
• 来源期刊: 江苏大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 复制缺陷型腺病毒 端粒酶启动子 肿瘤基因治疗
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 205-208
• 页数: 4页
• 分类号: R392.12
• 字数: 3222字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7783.2008.03.006

摘要

目的: 构建一种端粒酶启动子调控目的基因MDA-7/hIL24表达的复制缺陷型腺病毒,并初步探索其抗肿瘤活性.方法: 通过基因操作技术将启动子(hTERTp)+目的基因(MDA-7)插入到5型腺病毒E1A区域,构建复制缺陷型腺病毒AdTP-mda7;同时构建对照病毒AdTP-EGFP.TCID50法测定病毒滴度.应用蛋白质印迹法检测MDA-7在肿瘤细胞株中的表达状态;通过结晶紫染色实验检测两种病毒对肿瘤细胞的杀伤差异.结果: 成功构建携带目的基因的腺病毒载体,PCR鉴定正确;蛋白质印迹结果表明MDA-7选择性地在多种肿瘤细胞株中表达,诱导肿瘤细胞凋亡,如A549,SGC-7901等,在以相同MOI值感染原代成纤维细胞时,原代细胞中没有检测到MDA-7表达;结晶紫染色试验结果表明AdTP-mda7对肿瘤细胞株的杀伤能力明显高于对照病毒AdTP-EGFP.结论: 成功构建复制缺陷型腺病毒AdTP-mda7,并证实MDA-7蛋白在肿瘤细胞中过表达诱导多种肿瘤细胞株发生凋亡.