利用启动子缺陷型打靶载体敲除牛胎儿成纤维细胞中的Prnp

• 作者: 俞国华 俞慧清 成国祥 朱采红 李蓓 许媛媛 钱旻 陈建泉
• 来源期刊: 生物工程学报
• 学科: 农学
• 关键词: 基因打靶 启动子捕获策略 Prion病 牛胎儿成纤维细胞 Prnp
• 年，卷（期）: 2008,（11）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 1988-1992
• 页数: 5页
• 分类号: S8
• 字数: 4082字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3061.2008.11.022

摘要

利用启动子捕获对中靶细胞进行富集是提高体细胞基因打靶效率常用的策略之一.敲除动物的Prnp可使其具有抵抗Prion病感染的能力.采用启动子捕获策略,构建了牛Prnp启动子缺陷型打靶载体BoPrneo,线性化后,再通过电穿孔转染牛胎儿成纤维细胞BFF,用250 μg/mLG418进行药物筛选,共得到99个药物抗性细胞克隆.对细胞克隆进行PCR、测序及Southern blotting鉴定,结果表明,其中的4个细胞克隆为中靶细胞,说明牛胎儿成纤维细胞中的Prnp一条等位基因被成功敲除.本研究为牛Prnp的敲除提供了一种简单、安全、有效的方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	钱旻	华东师范大学生命科学学院	65	376	12.0	16.0
2	俞慧清		12	40	3.0	6.0
3	朱采红	同济大学生命科学与技术学院	3	8	2.0	2.0
4	俞国华		3	7	2.0	2.0
6	李蓓	同济大学生命科学与技术学院	17	386	9.0	17.0
7	陈建泉		36	123	6.0	9.0
10	许媛媛		1	2	1.0	1.0