利用PCR产物快速构建兔HPRT 基因无启动子打靶载体

• 作者: 姚刚 张传山 谷瑞环 郭毅 陈学进
• 来源期刊: 实验动物与比较医学
• 学科: 生物学
• 关键词: Red重组 PCR技术 次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶基因(HPRT) 打靶载体
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 86-92
• 页数: 7页
• 分类号: Q95-33
• 字数: 4081字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2009.02.004

摘要

目的 探讨构建兔HPRT基因打靶载体的方法,为下一步获得兔 HPRT基因敲除动物模型和转基因兔奠定基础.方法 首先在已经筛选到含有兔全长次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶 (Hypoxanthine guanine phosphoribosyl transferase,HPRT)基因BAC克隆(LBNL1-304M19)的基础上,利用Red重组系统,从此克隆上将一段12.5 kb无启动子的HPRT基因组片段克隆到pKS-质粒上,产生pKS-rHPRT质粒.然后基于pKS-rHPRT和pIGCN21质粒,通过PCR的方法获得两个不同的带有50 bp HPRT 基因同源序列的IRES-eGFPCre-Frt/Neo/Frt同源重组片段,最终构建 HPRT 基因敲除打靶载体和无启动子基因敲入型打靶载体.结果 PCR、限制性内切酶及DNA序列测定,表明载体构建成功.结论 成功快速地构建了HPRT 基因敲除打靶载体和无启动子基因敲入型打靶载体.同时对利用同源重组技术敲除或插入DNA片段的效率进行了研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姚刚	新疆农业大学动物医学学院	141	547	13.0	17.0
2	陈学进	上海交通大学医学院实验动物科学部	46	180	7.0	10.0
3	谷瑞环	上海交通大学医学院实验动物科学部	17	39	5.0	5.0
4	郭毅	上海交通大学医学院实验动物科学部	4	4	2.0	2.0
5	张传山	新疆农业大学动物医学学院	2	2	1.0	1.0