粉尘螨主要变应原Der f 1基因的改造与可溶性表达

• 作者: 何蔼 吴瑜 张瑞琳 李卓雅 王玲 甘明 詹希美 郑小英
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 粉尘螨 克隆 表达 重组变应原
• 年，卷（期）: 2008,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究论著
• 页码范围: 521-524
• 页数: 4页
• 分类号: R384.4
• 字数: 2963字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-3619.2008.06.001

摘要

目的 在大肠杆菌中提高粉尘螨1类变应原(Der f 1)的可溶性表达.方法 用RT-PCR方法扩增得到Der f 1的全长序列与成熟肽序列(mDer f 1);以已知Der P 5基因的前导序列替换Der f 1前导序列和原酶序列,重新构建出rDer f 1基因;将上述3个基因分别克隆人原核表达载体pGEX-4T-1中表达,经Western-blot对三者的表达产物进行分析鉴定.结果 Western-blot表明, pGEX-Der f 1与pGEX-mDer f 1的表达产物分别为分子量约63000与51000的重组蛋白质,重组蛋白质主要存在于细胞裂解液的沉淀中.pGEX-rDer f 1大量表达了可溶性目的 蛋白质,分子量约53000,并被成功地分离纯化.三种表达产物均可被鼠抗GST抗体与螨过敏患者血清特异地识别.结论 表达了含Der f 1, mDer f 1与rDer f 1的三种GST融合蛋白质,它们均具免疫反应性,纯化获得了CST-rDer f 1融合蛋白质,为后期的诊断及治疗奠定了基础.