假单胞菌DLL-E4尿黑酸降解基因的克隆与功能的初步分析

• 作者: 崔中利 曹慧 李晓丹 李顺鹏 沈文静 王世明 邓海华
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 生物学
• 关键词: 尿黑酸1,2-双加氧酶 转座子标签法 SEFA-PCR 同源重组 基因敲入
• 年，卷（期）: 2008,（z1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 445-450
• 页数: 6页
• 分类号: Q93
• 字数: 4080字
• 语种: 中文

摘要

通过接合转移将质粒pSC123上的转座子Tn5随机插入到DLL-E4基因组DNA中,从大约8,000个突变子中筛选到1株在LB培养基上积累红褐色物质的突变株M18,该突变株不能以L-苯丙氨酸(L-Phenylalanine,Phe)为唯一碳源生长.SEFA-PCR扩增转座子侧翼序列发现其与已报道的尿黑酸1,2-双加氧酶基因hmgA的同源性为92%.将hmgA定向克隆至表达载体pET-29a中,转化至Escherichia coli BL21,经IPTG诱导后可表达分子量约为48kD的蛋白;诱导后转化子粗酶液对尿黑酸有很好的降解效果.将hmsA连入自杀性载体pEXl9Gm,通过同源重组整合至M18染色体中,使其恢复了DLL-E4利用Phe的能力,证实了HmsA是尿黑酸苯环裂解酶.