细粒棘球绦虫TPx基因的克隆及序列分析

• 作者: 付宝权 史大中 张德林 李文卉 李永光 李航 王艳华 苟惠天 贾万忠
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 细粒棘球绦虫 硫氧还蛋白过氧化物酶 基因克隆 序列分析
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 病原生物学
• 页码范围: 191-195
• 页数: 5页
• 分类号: S852.734|Q785
• 字数: 4170字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2008.03.003

摘要

从自然感染病羊肝内收集细粒棘球绦虫(Eg)原头蚴,分别提取总RNA和基因组DNA.根据GenBank数据库中的细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(EgTPx)基因序列设计1对引物,以总RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增出EgTPx基因片段,同时以基因组DNA为模板扩增出对应的基因组序列.PCR产物经纯化后连接到pMDl8-T载体,转化至大肠杆菌DH5a后,进行序列测定和生物信息学分析.结果表明,成功扩增到中国青海株细粒棘球绦虫EgTPx基因片段,其开放阅读框为582 bp,编码193个氨基酸,与已知的EgTPx基因核苷酸序列及其编码蛋白氨基酸序列的同源性均为99%,有3个碱基发生变异,分别在245,306,318位由C变为T;引起1个氨基酸变异,由Ala82变为Val82.EgTPx具有典型的2-Cys型过氧化物氧还蛋白催化性位点Cys48和Cys169,以及周围保守的FVCP和VCPA序列.EgTPx基因的开放阅读框对应的基因组序列包含2个外显子和1个69 bp的内含子.