人PRL-3基因启动子的克隆及转录因子Snail结合位点的初步鉴定

• 作者: 丁彦青 周军 李建明 杨发达 柳玉红
• 来源期刊: 生物化学与生物物理进展
• 学科: 医学
• 关键词: PRL-3 启动子 Snail 转录调控
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 187-194
• 页数: 8页
• 分类号: Q7|R3
• 字数: 6394字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3282.2008.02.010

摘要

促肝细胞再生磷酸酶-3(PRL-3)是重要的肿瘤转移相关基因,其转录调控机制一直未被阐明.应用TRED在线分析系统共获得3种可能的人PRL-3基因启动子区域.通过与人基因组序列进行比对,发现其中3号启动子序列距离人PRL-3基因距离最近,位于该基因上游约1 kb的DNA区域,与5′端非翻译区域邻接.在线Consite分析系统发现,-500 bp至-451bp之间存在Snail结合的核心寡核苷酸序列CACCTG.运用分子克隆的方法获得PRL-3基因启动子2段区域-699 bp至299bp及-642 bp至-383 bp区域,后者具有Snail结合位点核心寡核苷酸序列CACCTG.构建具有荧光素酶报告基因的pGL3载体并检测其启动子活性.-699～299 bp区域与-642～-383 bp区域的DNA片段在SW480、SW620、CNE2、293A细胞中均具有启动子活性,其中含有Snail结合位点核心寡核苷酸序列CACCTG的短片段活性强于较完整的序列.染色质免疫沉淀结合PCR扩增技术及凝胶迁移阻滞实验确定PRL-3基因启动子区域具有Snail结合位点.研究确定,PRL-3基因的启动子位于转录起始位点上游700 bp与下游300 bp的DNA区域,PRL-3基因启动子存在转录因子Snail结合元件.