大鼠卡氏肺孢子虫ITS 1-5.8S rDNA-ITS2的巢式PCR检测及基因序列的测定

• 作者: 张陆娟 张鸿满 林睿 欧阳颐 江河 赵同领 黎学铭
• 来源期刊: 应用预防医学
• 学科: 医学
• 关键词: 卡氏肺孢子虫 内转录问隔区(ITS) 5.8S核糖体RNA基因(5.8S rDNA) 巢式PCR
• 年，卷（期）: 2008,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 257-262
• 页数: 6页
• 分类号: R382.3
• 字数: 2533字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-758X.2008.05.001

摘要

目的 探讨ITS1-5.8S rDNA-ITS2巢式PCR检测卡氏肺孢子虫的应用价值并测定其基因序列.方法 采用地塞米松免疫抑制法诱导SD大鼠感染肺孢子虫;制作肺印片、肺组织匀浆液及支气管肺泡灌洗液(BAL)涂片进行六亚甲基四胺银(GMS)染色镜检;提取肺孢子虫DNA进行巢式PCR扩增,测序后与GenBank的不同宿丰肺孢子虫相关序列进行比较分析.结果 用ITS1-5.8S rDNA-ITS2巢式PCR法均能检测出实验感染大鼠BAL和肺组织卡氏肺孢子虫DNA,阳性率为100%(10/10),比较BAL标本、肺印片和肺组织匀浆液GMS染色法的检出效率,BAL最低,肺组织匀浆液最高.其中20%(2/10)大鼠的BAL标本用GMS染色法未能检测出,但用巢式PCR方法 均能成功扩增;所测SD大鼠卡氏肺孢子虫ITS1-5.8S rDNA-ITS2基因序列长度为516bp,ITS1、5.8S rDNA、ITS2基因片段分别为198、158、160bp,与GenBank的大鼠(L27658)、小鼠(AY532651)和长爪沙鼠(AY875972)的ITS1-5.8S rDNA-ITS2基因的同源性分别为96%(452/467)、88%(275/310)、95%(152/159),其变异位点多在ITS1和ITS2基因片段.结论 ITS1-5.8S rDNA-ITS2巢式PCR检测卡氏肺孢子虫敏感性高、特异性强,可作为早期诊断肺孢子虫肺炎方法,特别适用无创性标本的检测;成功获取SD大鼠卡氏肺孢子虫ITS1-5.8S rDNA-ITS2的基冈序列,与不同宿主比较其5.8S rDNA较保守,ITS1和ITS2基因变异较大,适合基因分型和系统进化研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黎学铭		57	261	9.0	13.0
2	江河		32	134	6.0	8.0
3	林睿		29	156	7.0	11.0
4	赵同领		2	3	1.0	1.0
5	张鸿满		48	248	9.0	12.0
6	张陆娟		18	45	4.0	5.0
7	欧阳颐		31	111	5.0	9.0