稳定表达野生型PINK1蛋白SH-SY5Y细胞株的建立

• 作者: 原相丽 唐北沙 廖书胜 张玉虎 赵保路
• 来源期刊: 新乡医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: 常染色体隐性遗传早发性帕金森综合征 PINK1 稳定转染 SH-SY5Y细胞
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 240-244
• 页数: 5页
• 分类号: R735.1
• 字数: 3958字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-7239.2008.03.009

摘要

目的 构建常染色体隐性遗传早发性帕金森综合征(AREP)PINK1基因真核表达载体,建立稳定表达PINK1蛋白的人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞株.方法 采用聚合酶链反应(PCR)方法,以人胎脑cDNA文库为模板扩增PINK1基因全长cDNA编码区序列,重组DNA技术定向插入真核表达质粒pcDNA3.1-myc-his(-)B,经酶切和测序鉴定后,用脂质体转染SH-SY5Y细胞,通过G418筛选,挑选出稳定转染的单克隆株,经提取gDNA进行PCR扩增、反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot 法检测PINK1基因在DNA、mRNA水平及蛋白水平的表达.结果 成功构建了PINK1-pcDNA3.1-myc-his-(-)B真核表达载体,稳定转染SH-SY5Y细胞后,经提取gDNA扩增、RT-PCR及Western blot检测到了野生型PINK1基因在基因组的整合、转录和蛋白水平表达.结论 构建了PINK1基因真核表达载体和稳定表达PINK1蛋白的SH-SY5Y细胞株,为进一步研究PINK1基因功能及AREP发病机制提供了一个转基因细胞模型.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	唐北沙	中南大学湘雅医院神经内科	178	602	11.0	16.0
2	赵保路	中国科学院生物物理研究所脑与认知国家重点实验室	57	454	13.0	20.0
3	廖书胜	中南大学湘雅医院神经内科	18	120	7.0	10.0
4	原相丽	中南大学湘雅医院神经内科	2	5	1.0	2.0
5	张玉虎	中南大学湘雅医院神经内科	11	17	3.0	3.0