非洲马瘟病毒VP7基因拼接、表达及重组ELISA方法的建立与初步应用

• 作者: 乔彩霞 吴丹 张伟 张鹤晓 柏亚铎 汪琳 蒲静 谷强 赖平安 高志强
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 非洲马瘟 基因拼接 重组ELISA
• 年，卷（期）: 2008,（11）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 1548-1553
• 页数: 6页
• 分类号: S858.215.3|S852.659.4
• 字数: 5064字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0366-6964.2008.11.016

摘要

采用人工拼接的方式拼接了非洲马瘟病毒(AHSV)含有绝大多数线性抗原表位的VP7编码基因片段,克隆于pET-30a构建重组质粒pET-30a-VP7,将pET-30a-VP7转化BL21(DE3),经1.0 mmol/L IPTG 诱导,外源基因以包涵体的形式获得高效表达.通过Dot-ELISA以及ELISA试验证明表达产物具有良好的反应原性.以纯化后表达产物作为诊断抗原包被酶标板建立了检测AHSV抗体的间接ELISA 方法.结果表明,抗原的最佳包被浓度为0.25 μg/mL,血清的最佳稀释度为1:40,待检血清阳性临界值初步定为0.25.用此方法和商品化ELISA试剂盒检测了184份血清样品,结果完全符合.