大鼠VEGF腺病毒基因转染系统的构建及鉴定

• 作者: 杨宏宇 祁泓 章希炜 邹君杰
• 来源期刊: 中国普通外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 血管内皮生长因子 腺病毒载体 基因转染
• 年，卷（期）: 2008,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 574-577
• 页数: 4页
• 分类号: R322.1
• 字数: 3342字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-6947.2008.06.013

摘要

目的 探讨构建携带大鼠血管内皮细胞生长因子(VEGF)的重组腺病毒载体方法 ,为后续的基因转染研究作准备.方法 采用RT-PCR扩增的方法 获取鼠源性的VEGF,并克隆入穿梭质粒pDC316.构建的质粒pDC316-VEGF经酶切及测序鉴定正确后,通过lipofectamine2000的介导与腺病毒包装质粒pBHGE3共转染至人胚肾细胞HEK293,经同源重组后获得携带鼠VEGF的重组腺病毒VDC316-VEGF.应用PCR鉴定重组腺病毒,空斑传代纯化病毒并反复冻融扩增病毒.以50%组织培养感染剂量法(TCID50)测定病毒滴度.结果 PCR鉴定证实重组腺病毒含有鼠VEGF,病毒滴度为3×109pfu/mL.结论 成功构建的携带大鼠VEGF的重组腺病毒载体能在HEK293细胞内扩增获得足够高的病毒滴度,可作为后续基因治疗研究工作中可靠的基因转染工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	章希炜	南京医科大学第一附属医院血管外科	65	276	8.0	13.0
2	邹君杰	南京医科大学第一附属医院血管外科	36	123	5.0	7.0
3	杨宏宇	南京医科大学第一附属医院血管外科	61	236	8.0	12.0
4	祁泓	南京医科大学公共卫生学院	1	1	1.0	1.0