抗人CD14新克隆ZCH-7-2F9单链抗体的真核表达和初步鉴定

• 作者: CAO Jiang 宁铂涛 汤永民 沈红强 钱柏芹
• 来源期刊: 中华儿科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 单链抗体 中华仓鼠卵巢(CHO)细胞 CD14 真核 表达
• 年，卷（期）: 2008,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 605-609
• 页数: 5页
• 分类号: R72
• 字数: 4132字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0578-1310.2008.08.010

摘要

目的 在真核细胞中表达Zhejiang Children's Hospital(ZCH)-7-2F9(简称2F9)单链抗体(scFv2F9)以获得高活性的目的 蛋白,为2F9其他类型的基因工程抗体及其免疫毒素的研究奠定基础.方法 根据pSectag2A多克隆位点、(G4S)3及scFv2F9基因序列,设计含有SfiI、EcoRI酶切位点、6xHis以及终止密码TGA的引物,采用高保真的Taq酶,通过重叠延伸拼接法(splicing by overlapextension,SOE)扩增克隆到scFv2F9基因,将扩增到的目的 基因片段克隆到pGEM T-easy载体,测序核实后再克隆到pSectag2A真核分泌型表达载体中.阳性重组质粒pSectag2A/scFv2F9转染中华仓鼠卵巢(CHO)细胞进行目的 蛋白的瞬时表达,将培养上清浓缩后,流式细胞术观察其对亲本单抗的阻滞效果.结果 真核分泌型表达载体pSectag2A/scFv2F9在CHO细胞中获得成功表达,其相对分子质量为31 000.亲本直标单抗2F9-FITC被真核细胞表达的scFv2F9阻滞后其阳性细胞百分数、平均荧光强度和最高峰值分别下降了90.02%、63.30%和63.38%.结论 克隆到的2FgVH和2F9VL基因及构建的真核分泌型表达载体pSectag2A/scFv2F9是正确的,scFv2F9在CHO细胞中获得成功的表达,且有较高的识别和结合人CD14抗原的功能.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	汤永民	浙江大学附属儿童医院血液肿瘤科	83	340	10.0	13.0
2	宁铂涛	浙江大学附属儿童医院血液肿瘤科	17	63	4.0	7.0
3	沈红强	浙江大学附属儿童医院血液肿瘤科	31	83	5.0	7.0
4	钱柏芹	浙江大学附属儿童医院血液肿瘤科	16	40	4.0	5.0
5	CAO Jiang	浙江大学附属儿童医院血液肿瘤科	1	0	0.0	0.0