抗恙虫病东方体噬菌体抗体库的构建和初步筛选

• 作者: 何蔼 吴瑜 尹应先 张豪 李卓雅 程梅 詹希美 郑小英 黄会
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 恙虫病东方体 噬菌体抗体库
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究论著
• 页码范围: 241-243,249
• 页数: 4页
• 分类号: R376.2
• 字数: 3085字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-3619.2008.03.016

摘要

目的 构建抗恙虫病东方体噬菌体抗体库并进行初步筛选,获得与恙虫病东方体膜抗原特异性结合的抗体克隆,为研制恙虫病的快速诊断试剂盒奠定基础.方法 从感染恙虫病东方体小鼠的脾细胞中提取RNA,经逆转录、PCR扩增出抗体轻链和重链基因,将轻链基因和表达载体pComb3进行酶切、连接.转化大肠杆菌XL1-blue,构建轻链库;再对轻链重组质粒和重链Fd基因进行酶切、连接,转化大肠杆菌XL1-blue,构建组合文库,以辅助噬菌体VCS M13进行超感染.用恙虫病东方体56 kDa型特异性抗原作为筛选抗原,进行4轮富集筛选后用ELISA法进行阳性克隆的鉴定.结果 构建了库容为3.46×106的鼠源性抗恙虫病东方体的噬菌体Fab片段抗体库.经过4轮富集筛选,抗体库中的目的 抗体得以富集约160倍,并用ELISA法对其进行鉴定,得到了7个阳性克隆.结论 构建的抗恙虫病东方体噬菌体抗体库,库容为3.46×106,滴度为2.5×1012 cfu/ml,基本上达到了建库要求,能够满足多样性的需求,并成功的筛选出抗恙虫病东方体56 kDa蛋白的抗体,用过氧化物酶标记的抗M13抗体进行了初步鉴定,认为具有一定的特异性.