百日咳丝状血凝素分子中强免疫原性片段的筛选、克隆与表达

• 作者: 张卫军 张晓丽 章金勇 邹全明
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 百日咳杆菌 丝状血凝素 基因克隆 原核表达 免疫原性
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 12-15
• 页数: 4页
• 分类号: R516.6|Q786
• 字数: 2920字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-5503.2008.01.004

摘要

目的 筛选百日咳丝状血凝素分子中强免疫原性的片段,并对其进行克隆及表达.方法 采用生物信息学软件对丝状血凝素分子的结构进行预测,从中筛选出具有强免疫原性的片段FHAs.经PCR扩增,T-A克隆后,构建表达质粒pET-22b(+)-FHAs,酶切鉴定正确后测序.将测序正确的质粒转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导目的蛋白的表达,并对表达产物进行Tricine-SDS-PAGE分析及Western blot鉴定.结果 从丝状血凝素分子中筛选出具有138个氨基酸的肽段FHAs,经PCR扩增,得到约400 bp的目的基因片段,构建的重组质粒经双酶切和测序鉴定,证明质粒构建正确,重组工程菌pET-22b(+)-FHAs/BL21经IPTG诱导,目的蛋白的表达量在50%以上,主要以包涵体形式存在.Western blot分析证实该蛋白能与抗FHA单抗发生反应.结论 筛选出的肽段FHAs具有强的免疫原性和免疫反应特异性,为百日咳基因工程疫苗的研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邹全明	第三军医大学临床微生物与免疫学教研室重庆市生物制药工程技术研究中心	258	1589	19.0	26.0
2	章金勇	第三军医大学临床微生物与免疫学教研室重庆市生物制药工程技术研究中心	12	38	4.0	5.0
3	张晓丽	第三军医大学临床微生物与免疫学教研室重庆市生物制药工程技术研究中心	19	78	6.0	7.0
4	张卫军	第三军医大学临床微生物与免疫学教研室重庆市生物制药工程技术研究中心	58	319	11.0	13.0