全人源抗肝癌噬菌体单链抗体的筛选与鉴定

• 作者: 周国华 李官成 李跃辉 童永清 肖艳 胡锦跃 郭锋杰 黄建
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: EB病毒转化 噬菌体抗体库 肝肿瘤 单链抗体
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 抗体工程
• 页码范围: 256-259
• 页数: 4页
• 分类号: R739.63
• 字数: 3113字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1007-8738.2008.03.016

摘要

目的: 构建人源抗肝癌噬菌体单链抗体库, 从中筛选抗肝癌单链抗体(scFv), 并对其特异性进行鉴定.方法: 采用体外致敏法和EBV转化技术联合噬菌体展示技术构建噬菌体抗体库.对初级抗体库进行亲和富集及ELISA筛选, 获得的阳性克隆进行免疫组化鉴定并测序.结果: scFv基因与载体连接后得到库容量为1.0×108的初级噬菌体抗体库.对抗体库进行3轮正负淘选和富集后, 随机挑取2 798个克隆进行ELISA, 发现3个克隆对HepG2呈强阳性反应, 而与QSG-7701等人正常细胞系呈弱阳性或不反应.对克隆SA3进行免疫细胞化学鉴定, 结果与ELISA一致.免疫组织化学鉴定表明SA3与肝癌组织和肝组织阳性率的差别有统计学意义.结论: 构建了库容量达1×108的全人源抗肝癌噬菌体抗体库.通过淘选富集、 ELISA和免疫组织化学鉴定获得特异性较强的噬菌体克隆, 为肝癌的临床诊断及导向治疗奠定了基础.