大肠癌相关基因PGDH原核表达质粒的构建及表达

• 作者: 冯燕 常冰梅 张悦红 李美宁 殷云勤 程牛亮 解军
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 大肠癌 15-羟基前列腺素脱氢酶 克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 277-280
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 2868字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-5503.2008.04.006

摘要

目的 构建15-羟基前列腺素脱氢酶(PGDH)原核表达质粒,并在大肠杆菌中诱导表达PGDH蛋白.方法 以人正常大肠黏膜组织总RNA为模板,利用RT-PCR扩增PGDH基因的编码序列,克隆入原核表达载体pBV220,转化E.coli DH5a,经温控诱导表达,并经Ni2+ -NTA亲和层析纯化,目的 蛋白进行SDS-PAGE和Western blot鉴定.结果 重组质粒pBV220-PGDH-Hia6经PCR及酶切鉴定,证明质粒构建正确.经温控诱导后,可表达出相对分子质量约为29 000的PGDH-His6蛋白,表达产物以包涵体形式存在,3 h诱导表达量最高,约占菌体总蛋白的30%.Western blot验证了表达蛋白的特异性.纯化后目的 蛋白纯度大于95%.结论 已成功构建PGDH原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达了PGDH蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	程牛亮	山西医科大学生物化学与分子生物学教研室	98	448	11.0	16.0
2	解军	山西医科大学生物化学与分子生物学教研室	142	537	11.0	15.0
3	张悦红	山西医科大学生物化学与分子生物学教研室	104	446	11.0	15.0
4	李美宁	山西医科大学生物化学与分子生物学教研室	31	107	6.0	8.0
5	常冰梅	山西医科大学生物化学与分子生物学教研室	42	166	7.0	11.0
6	殷云勤	山西医科大学第一医院消化检验中心	33	75	5.0	7.0
7	冯燕	山西医科大学生物化学与分子生物学教研室	4	13	2.0	3.0