TK基因重组质粒的构建及在ACC-2细胞中的表达

• 作者: 刘桂军 张世周 张东升 张捷 牟文丽 黄圣运
• 来源期刊: 临床口腔医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 胸腺嘧啶核苷激酶 自杀基因 核酸内切酶 转染 腺样囊性癌
• 年，卷（期）: 2008,（11）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 643-646
• 页数: 4页
• 分类号: Q786
• 字数: 3031字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1003-1634.2008.11.001

摘要

目的 克隆胸腺嘧啶核苷激酶(TK)基因,构建质粒表达载体pIRES-TK,并利用该载体转染ACC-2细胞,建立了稳定表达TK基闪的ACC-2细胞克隆.方法 通过PCR从逆转录病毒重组体pLNSX-TK中扩增出TK基因全长序列,将扩增产物定向插入到克隆载体pMD18-T中进行序列测定,测序正确后将其亚克隆到质粒表达载体pIRES中,构建重组表达载体pIRES-TK,用电穿孔法以该质粒转染ACC-2细胞,经G418筛选获得稳定表达TK基因的ACC-2细胞株,提取该细胞株的总RNA,用RT-PCR检测TK基因的表达.结果 PCR扩增出1128 bp大小的片段,测序结果与GeneBank报道的TK序列基本一致;阳性重组质粒pIRES-TK经XhoI和MulI双酶切后获得2692 Bb和1128 bp的片段:RT-PCR从转染细胞的总RNA中扩增出361 bp的预期片段.结论 成功扩增了TK基因的DNA片段;成功构建了质粒表达载体pIRES-TK:建立了稳定表达TK基因的ACC-2细胞株,为TK/GCV自杀基因系统在腺样囊性癌基因治疗中的应用奠定良好的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张东升	山东大学附属省立医院口腔颌面外科	48	186	7.0	11.0
2	张世周	山东大学附属省立医院口腔颌面外科	22	84	5.0	8.0
3	刘桂军	山东大学附属省立医院口腔颌面外科	8	15	2.0	3.0
4	牟文丽	山东大学附属省立医院科研中心	10	26	3.0	5.0
5	黄圣运	山东大学附属省立医院口腔颌面外科	22	68	5.0	7.0
6	张捷	山东大学附属省立医院科研中心	28	138	6.0	10.0