RNA干扰CA916798基因真核表达载体的构建与鉴定

• 作者: 周向东 杨和平 王海晶
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: CA916798 RNA干扰 真核表达载体 构建 转染
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 23-26
• 页数: 4页
• 分类号: R394-33|R734.2
• 字数: 3175字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2008.01.007

摘要

目的 构建CA916798基因RNA干扰(RNAi)的真核细胞表达载体.方法 以CA916798为靶基因,以pGenSil-l质粒为载体,设计构建重组体,根据GenBank数据库提供的CA916798基因核苷酸序列,按照Tuschl设计原则,选择设计2条带发夹结构的核苷酸序列,克隆到空载体pGenSil-l中,转化DH5α菌株,提取质粒,进行限制性内切酶酶切鉴定和测序分析.用脂质体2 000将重组质粒转染A549/CDDP细胞并用G418筛选,MTT法测定药物敏感性并绘制细胞增殖曲线.结果 构建针对CA916798的pRNAi-CA916798shRNA,经限制性内切酶酶切、PCR和DNA测序证实与设计完全一致;在荧光显微镜下观察到A549/CDDP细胞表达绿色荧光蛋白(GFP)证实重组质粒已转染入细胞并用G418剔除了未转染质粒的细胞,1.0μg/ml顺铂作用后pRNAi-CA916798shRNA转染组细胞增殖受到明显抑制(P＜0.01).结论 成功构建CA916798基因的shRNA表达载体,并筛选出转染了CA916798shRNA的A549/CDDP细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨和平	第三军医大学西南医院呼吸内科	135	1059	16.0	26.0
2	周向东	第三军医大学西南医院呼吸内科	89	723	15.0	22.0
3	王海晶	第三军医大学西南医院呼吸内科	13	127	6.0	11.0