表达HIV Vpr细胞株的建立及其促细胞凋亡作用的研究

• 作者: 丁佩佩 刘猛 刘纯 周华英 张春迎 李慧 李瑛 袁宏丽 谌资 郑煜煌 龚国忠
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人免疫缺陷病毒 vpr基因 转染 凋亡 变异
• 年，卷（期）: 2008,（6）
• 所属期刊栏目: 病毒学
• 页码范围: 545-549
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 4345字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0254-5101.2008.06.018

摘要

目的 建立稳定表达人免疫缺陷病毒(HIV)Vpr蛋白的细胞株,观察Vpr蛋白促进感染细胞凋亡的特性,以及Vpr变异后对其致凋亡作用的影响.方法 以携带野生株HIV Vpr基因和突变株HIV vpr-FS基因的质粒分别转染HeLa细胞,建立稳定表达HIV Vpr蛋白的细胞株,以流式细胞仪和细胞内DNA片段分析法检测细胞凋亡效果,观察Vpr蛋白促细胞凋亡的特性,以及两者致凋亡作用的区别.结果 重组质粒pcDNA3.1-vpr和pcDNA3.1-vpr-FS经酶切后均可获得342bp产物,DNA测序结果与目的 基因已知序列完全一致;上述质粒转染的HeLa细胞,RT-PCR检测到目的 基因vpr或vpr-FS的表达,Western blot检测到明显Vpr或Vpr-FS蛋白的表达.流式细胞仪和细胞内DNA片段分析法分别检测细胞凋亡,显示野生株HeLa pcDNA3.1-vpr组的凋亡率明显高于对照组,而变异株HeLa pcDNA3.1-vpr-FS的凋亡率与对照组无明显差别.结论 成功建立了表达HIV Vpr和HIVVpr-FS蛋白的感染细胞株.实验显示HIV Vpr蛋白能促进感染细胞的凋亡,而Vpr蛋白的变异可能使其促进细胞凋亡作用减弱.实验结果为下一步研究提供了基础资料.