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大鼠成纤维细胞生长因子2分子克隆及其真核表达载体的构建
大鼠成纤维细胞生长因子2分子克隆及其真核表达载体的构建
作者:
吕海军
张学光
张燕
李肖蓉
杨丽华
王如兴
陈永井
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
成纤维细胞生长因子2
心肌/细胞学
载体构建
大鼠
组织构建
摘要:
目的:实验旨在克隆大鼠成纤维细胞生长因子2CDS区基因全长,并将其于真核表达载体PIRES2-EGFP相连接,构建成纤维细胞生长因子2的真核表达载体.方法:实验于2007-03/06在苏州大学生物技术研究所完成.①实验材料:克隆载体PMD18-T-vector(takara):真核表达载体PIRES2-EGFP由苏州大学第一附属医院消化科叶建新博士惠赠:大肠杆菌TOP10购自英俊公司:清洁级新生一两天SD大鼠2只.②实验过程及评估:体外分离培养新生SD大鼠心室肌细胞.Trizol法抽提心室肌细胞总mRNA,采用反转录-聚合酶链反应的方法反转录获得总的cDNA,聚合酶链反应的方法扩增成纤维细胞生长因子2基因的CDS区片断全长.将扩增出来的基因片断和克隆载体PMD18-T-vector连接,转化TOP10感受态细菌,阳性克隆经电泳,质粒聚合酶链反应和酶切等鉴定正确后送去测序确认.测序正确后抽重组质粒,bgl Ⅱ和pst Ⅰ同时双酶切PMD18-T-FGF-2和PIRES2-EGFP,将切下的目的基因片段和线性PIRES2-EGFP空质粒载体在T4DNA连接酶作用下进行连接,构建其真核表达载体.结果:①成功培养出了形态典型的SD大鼠的心室肌细胞.②所获的大鼠成纤维细胞生长因子2DNA序列与GeneBank中收录的大鼠成纤维细胞生长因子2序列完全一致.③PIRES2-EGFP-bFGF真核表达载体的构建测序表明,成纤维生长因子2成功插入真核表达载体PIRES2-EGFP之中.结论:实验成功克隆了大鼠成纤维细胞生长因子2基因全长,并构建了其真核表达载体.为转基因细胞制备和移植治疗心肌梗死奠定基础.
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成纤维细胞生长因子2
RTP801增强子
载体构建
基因表达
内容分析
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期刊文献
内容分析
关键词云
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相关文献总数
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文献信息
篇名
大鼠成纤维细胞生长因子2分子克隆及其真核表达载体的构建
来源期刊
中国组织工程研究与临床康复
学科
医学
关键词
成纤维细胞生长因子2
心肌/细胞学
载体构建
大鼠
组织构建
年,卷(期)
2008,(15)
所属期刊栏目
技术与方法
研究方向
页码范围
2875-2878
页数
4页
分类号
R329.114
字数
4934字
语种
中文
DOI
10.3321/j.issn:1673-8225.2008.15.018
五维指标
传播情况
被引次数趋势
(/次)
(/年)
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引文网络
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研究主题发展历程
节点文献
成纤维细胞生长因子2
心肌/细胞学
载体构建
大鼠
组织构建
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
中国组织工程研究
主办单位:
中国康复医学会
《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
出版周期:
旬刊
ISSN:
2095-4344
CN:
21-1581/R
开本:
大16开
出版地:
沈阳浑南新区10002信箱
邮发代号:
8-584
创刊时间:
1997
语种:
chi
出版文献量(篇)
55677
总下载数(次)
80
总被引数(次)
337465
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