实时荧光PCR检测17-AAG对人RPE细胞Akt等基因表达的调控

• 作者: 刘庆淮 姚家奇 李建民 许志洋
• 来源期刊: 国际眼科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: SYBRGreen 实时荧光PCR 17-AAG 视网膜色素上皮 增生性玻璃体视网膜病变 热休克蛋白90
• 年，卷（期）: 2008,（9）
• 所属期刊栏目: 实验论著
• 页码范围: 1792-1794
• 页数: 3页
• 分类号: R77
• 字数: 3206字
• 语种: 中文

摘要

目的:建立检测17-AAG对人RPE细胞不同处理条件下mRNA的SYBR Green实时PCR方法,观察17-AAG对人RPE细胞中Akt,Raf,Hsp90,Hsp70基因表达的调控.方法:体外培养人RPE细胞株.当加入处理因素17-AAG并作用不同浓度及时间梯度后,收集细胞,抽提RNA进行反转录.同时根据Akt,Raf,Hsp90,Hsp70的基因序列,设计Akt1,Raf1,Hsp90,Hsp70的引物,利用ABI 7300PCR仪和SYBR Green,建立实时荧光PCR反应条件,通过比较Ct进行基因表达的相对定量分析.结果:熔解曲线分析和琼脂糖凝胶电泳结果证明了PCR反应的特异性;相对定苗结果显示,17-AAG可以下调Akt及Raf基因的表达,上调Hsp90及Hsp70基因表达.结论:应用SYBR Green实时荧光PCR可以特异、准确地分析RPE细胞相关增殖基因表达差异,为系统研究17-AAG治疗PVR的复杂调控机制创造有力条件.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘庆淮	南京医科大学第一附医院眼科	105	342	9.0	11.0
2	李建民	南京医科大学第一附医院眼科	30	187	4.0	13.0
3	姚家奇	南京医科大学第一附医院眼科	7	35	4.0	5.0