刺梨RNA的有效提取及Actin基因片段的克隆

• 作者: 刘厚宇 刘明 安华明 李德燕 李顺雨 杨玉 王立新 黄伟
• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 刺梨 肌动蛋白 克隆
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 农业生物技术
• 页码范围: 1373-1374
• 页数: 2页
• 分类号: Q78
• 字数: 1982字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0517-6611.2008.04.043

摘要

[目的]为刺梨的分子生物学研究奠定技术基础.[方法]分别采用改进的CTAB-LiCl法和CTAB法提取刺梨果实中的总RNA和基因组DNA.对刺梨总RNA进行反转录,生成cDNA第1链.根据GenBank上的蔷薇科肌动蛋白(Actin)基因保守序列设计1对跨内含子引物Actin1和Actin2,以cDNA第1链和基因组DNA为模板进行RT-PCR扩增.将含有目的片段的凝胶进行回收纯化,克隆到PMD18-T载体上,转化大肠杆菌TG1感受态细胞,选取带有目的片段的重组质粒进行测序和序列分析.[结果]将目的片段回收后克隆于T载体,可获得298 bp Actin基因的cDNA序列.克隆所得核苷酸序列与蔷薇、桃和葡萄的核苷酸序列相似性达83%,与富士苹果、甜菜等的相似性也超过80%.刺梨Actin基因编码的氨基酸序列与梨的相似性最高(达97%),其次是葡萄、花生、大豆、棉花和马铃薯,而与水稻、拟南芥等的相似性也达90%以上.[结论]Actin基因跨内含子,用该Actin基因片段作内标可以减少DNA污染. MD18-T载体上,转化大肠杆菌TG1感受态细胞,选取带有目的片段的重组质粒进行测序和序列分析.[结果]将目的片段回收 克隆于T栽体,可获得298 bp Actin基因的cDNA序列.克隆所得核苷酸序列与蔷薇、桃和葡萄的核苷酸序列相似性达83%,与富士苹果、甜菜等的相似性也超过80%.刺梨Actin基因编码的氨基酸序列与梨的相似性最高(达97%),其次是葡萄、花生、大豆、棉花和马铃薯,而与水稻、拟南芥等的相似性也达90%以上.[结论]Actin基因跨内含子,用该Actin基因片段作内标可以减少DNA污染. MD18-T载体上,转化大肠杆菌TG1感受态细胞,选取带有目的片段的重组质粒进行测