人IgG Fc基因的扩增及其在真核细胞中的分泌性表达

• 作者: 仲峰 仲飞 李秀锦 贾翠云
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: IgG Fc 293T 细胞 分泌表达 CD5信号肽
• 年，卷（期）: 2009,（6）
• 所属期刊栏目: 分子与细胞免疫学
• 页码范围: 496-499
• 页数: 4页
• 分类号: R392.3
• 字数: 3564字
• 语种: 中文

摘要

目的:通过扩增人IgG Fc基因并与人CD5基因信号肽序列融合,构建真核分泌型表达载体,实现在真核细胞中高效表达,为利用Fc基因制备融合抗原,研究抗原基因和抗原蛋白的免疫治疗奠定了基础.方法:从外科手术切除的扁桃体中分离人淋巴细胞,用Trizol试剂提取淋巴细胞的总RNA,通过RT-PCR方法从淋巴细胞中扩增人IgG Fc 片段的基因序列,并将其克隆到pMD-T18 质粒载体上.然后以上述含有Fc片段序列的质粒载体和含有人CD5基因的质粒为模板,通过重叠延伸PCR方法将Fc片段与CD5信号肽基因序列进行融合,并将其插入到pcDNA3.1A 真核表达载体上,构建成与CD5信号肽融合的Fc片段基因的分泌型表达载体.经磷酸钙介导转染293T细胞使其表达.结果:测序表明扩增的Fc基因序列与GeneBank发表的序列完全一致,Western blot检测结果表明,本实验构建的Fc基因分泌型表达载体能够在真核细胞进行高效分泌性表达,表达水平在转染后48小时可达50 μg/1×106细胞.结论:采用RT-PCR扩增了人IgG Fc cDNA 基因,经过与人CD5信号肽序列融合构建了分泌型表达载体,实现了在293T细胞中的高效表达,这为今后构建特定抗原基因与IgG Fc基因融合表达载体,研究DNA疫苗及Fc的生物佐剂提供了实验依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李秀锦	燕山大学环境与化学工程学院生物工程系	20	122	7.0	10.0
2	仲飞	燕山大学环境与化学工程学院生物工程系	10	73	5.0	8.0