密码子优化的HPV6b L1 DNA诱导BALB/c小鼠产生增强的免疫应答

• 作者: 孟锐锋 张丽芳 朱珊丽 石朝辉 肖敏 陆丽君
• 来源期刊: 国际生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人乳头瘤病毒6 衣壳蛋白质类 密码子 抗体生成 免疫,细胞
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 169-174
• 页数: 6页
• 分类号: R3
• 字数: 4403字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1673-4211.2009.04.001

摘要

目的 探讨真核细胞偏好密码子优化对人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)6b型L1 DNA诱导BALB/c小鼠特异性体液和细胞免疫应答的增强效应.方法 利用PCR从尖锐湿疣组织中扩增HPV6b L1基因,将其克隆至真核表达质粒pcDNA3.1(+),构建野生型pcDNA3.1(+)/HPV6bL1(wt)并进行鉴定;同时,对HPV6b L1基因进行真核细胞偏好密码子优化,进一步通过重叠PCR的方法获得全长基因,构建密码子优化的重组质粒pcDNA3.1(+)/HPV6bL1(mod.)并进行鉴定.将6～8周龄雌性BALB/c小鼠分成4组,分别肌肉注射3次pcDNA3.1(+)/HPV6bL1(mod.)、pcDNA3.1(+)/HPV6bL1(wt)、pcDNA3.1(+)载体和PBS,间隔2周,每次剂量为150μg/鼠.分别于免疫前和免疫后每隔2周,收集血清,用间接ELISA检测血清igG抗体;并于第8周取小鼠脾细胞,采用乳酸脱氢酶释放法,按效应细胞与靶细胞之比(E:T)为5:1、10:1、20:1进行免疫小鼠特异性CTL杀伤活性检测.结果 成功构建了密码子优化的HPV6b L1重组质粒.小鼠免疫后血清特异性IgG抗体水平随着免疫时间和次数的增加而升高.pcDNA3.1(+)/HPV6bL1(mod.)组血清IgG抗体在第8周达到高峰,与pcDNA3.1(+)/HPV6bL1(wt)、载体和PBS对照组相比差异均有统计学意义(t=18.138、t=29.140、t=30.840,P值均＜0.01);而pcDNA3.1(+)/HPV6bL1(wt)组与载体和PBS组比较差异也有统计学意义(t=20.072、t=22.457,P值均＜0.01).在特异性CTL杀伤实验中,当E:T分别为5:1、10:1、20:1时,pcDNA3.1(+)/HPV6bL1(mod.)组的脾细胞特异性CTL杀伤率明显高于pcDNA3.1(+)/HPV6bLl(wt)组(t=11.892、t=15.329、t=2.911,P值均＜0.05)、载体组(t=12.936、t=16.613、t=13.90l,P值均＜0.01)和PBS对照组(t=14.768、t=18.935、t=10.925,P值均＜0.01).结论 密码子优化的HPV6b L1 DNA可诱导BALB/c小鼠产生增强的特异性体液和细胞免疫应答.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	石朝辉	河南省平顶山疾病预防控制中心检验科	3	2	1.0	1.0
2	朱珊丽	分子病毒与免疫研究所温州医学院微生物学与免疫学教研室	2	1	1.0	1.0
3	张丽芳	分子病毒与免疫研究所温州医学院微生物学与免疫学教研室	2	1	1.0	1.0
4	陆丽君	分子病毒与免疫研究所温州医学院微生物学与免疫学教研室	1	0	0.0	0.0
5	孟锐锋	分子病毒与免疫研究所温州医学院微生物学与免疫学教研室	1	0	0.0	0.0
6	肖敏	实验动物中心温州医学院微生物学与免疫学教研室	1	0	0.0	0.0