利用酵母双杂交系统筛选猪Calsarcin-1基因相互作用蛋白

• 作者: 伍晓雄 储明星 崔文涛 朱文娟 李奎 杨述林 杨锷 牟玉莲 马月辉
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪 骨骼肌 Calsarcin-1基因 酵母双杂交
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 畜牧·资源昆虫
• 页码范围: 663-668
• 页数: 6页
• 分类号: S8
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2009.02.035

摘要

[目的]利用酵母双杂交系统研究与猪Calsarcin-1相互作用的蛋白,了解Calsarcin-1在猪骨骼肌纤维类型形成和信号通路的调控功能.[方法]首先用长白猪Calsarcin-1基因构建既无自激活性又无毒性的pGBKT7-CS1诱饵载体;然后从猪的骨骼肌组织样中提取mRNA,利用SMART技术合成并纯化双链cDNA;最后通过酵母双杂交系统的共转化法筛选与Calsarcin-1相互作用的蛋白,在GenBank中比对分析相互作用基因,分析Calsarcin-1在骨骼肌中的功能.[结果]构建了pGBKT7-CS1诱饵载体,获得具有完整3'端的猪骨骼肌单链cDNA,并合成双链cDNA.筛选出4个与Calsarcin-1相互作用的蛋白,经与人的基因比较分析,发现Calsarcin-1与α-1肌动蛋白和α-3辅肌动蛋白互作,与骨骼肌Z线附近结构形成有关;与肌集钙蛋白-1和肌钙蛋白T3互作,影响钙离子的调控.[结论]分析所筛选出的蛋白功能,推测Calsarcin-1通过结合这些蛋白,维持细胞结构的稳定,影响相关蛋白的钙离子结合能力,从而参与钙高子调控;而钙离子浓度的变化将影响到其它控制肌纤维分化的因子,或其它调控通路,共同调节快慢肌纤维的形成与转化.