抗炭疽保护性抗原人-鼠嵌合抗体在CHO细胞中的表达和活性研究

• 作者: 付玲 任军 侯利华 刘树玲 张军 张金龙 徐俊杰 李冰 李建民 陈薇
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 炭疽 人-鼠嵌合抗体 CHO细胞
• 年，卷（期）: 2009,（12）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 1069-1074
• 页数: 6页
• 分类号: R3
• 字数: 5237字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2009.12.004

摘要

目的 在CHO细胞中表达抗炭疽芽孢杆菌保护性抗原(rPA)人-鼠嵌合抗体,并对其活性进行分析.方法 RT-PCR克隆具有中和活性鼠源单克隆抗体的轻、重链可变区基因,分别与人Kappa型轻链恒定区、IgG1重链恒定区基因融合后构建了轻重链嵌合抗体基因.将轻重链嵌合抗体基因克隆表达载体上,构建了嵌合抗体的双启动子表达载体pSeeTag-5E1.将pSecTag-5E1转染CHO-dhfr(DG44)细胞,撤掉胸腺嘧啶和次黄嘌呤并不断提高氨甲蝶呤(MTX)的浓度,筛选表达量高的克隆,扩大培养,收集上清,并纯化,用纯化的嵌合抗体进行SDS-PAGE、Western blot、抗原结合活性、体外细胞保护试验和动物试验.结果 在MTX的浓度为5×10~(-8)mol/L时,获得稳定表达细胞株,表达量为18 mg/L.结论 成功在CHO-dhfr(DG44)细胞中表达了具有中和活性的抗rPA人-鼠嵌合抗体,为制备抗炭疽的被动免疫制剂奠定了良好的基础.