萤火虫荧光素酶报告基因重组逆转录病毒载体的构建及鉴定

• 作者: 叶平 杨月峰 王华 王立生 王荣亮 盖鲁粤 边素艳 郭子宽
• 来源期刊: 组织工程与重建外科杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic 重组逆转录病毒载体pLXSN 构建
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 75-78
• 页数: 4页
• 分类号: Q784
• 字数: 3653字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-0364.2009.04.004

摘要

目的 构建含萤火虫荧光素酶报告基因的逆转录病毒载体,为进一步研究生物发光活体动物体内光学成像奠定基础.方法 利用重组DNA技术,将荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic双酶切得到的目的 基因fluc+亚克隆至逆转录病毒载体pLXSN中,重组质粒pL(fluc)SN在脂质体介导下"乒乓"转染GP+E86和PA317包装细胞,G418筛选,直至出现抗性克隆.扩大培养,测定病毒滴度,并检测荧光素酶活性.结果 经限制性酶切分析鉴定,载体插入基因大小、位置均正确,并用GP+E86和PA317细胞进行包装、病毒滴度测定、筛选,建立具有较高滴度的重组逆转录病毒fluc细胞系,该细胞可高效表达荧光素酶.结论 成功构建了重组质粒pL(fluc)SN,为标识干细胞进行基础研究提供了一种检测方法 和平台.