小麦胚乳14-3-3蛋白的表达及其与淀粉体淀粉合成酶的互作

• 作者: Ian J TETLOW Michael J EMES 刘爱峰 宋健民 戴双 李豪圣 楚秀生 程敦公
• 来源期刊: 作物学报
• 关键词: 小麦14-3-3蛋白 表达 淀粉合成酶 蛋白互作
• 年，卷（期）: 2009,（8）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·分子遗传学
• 页码范围: 1445-1450
• 页数: 6页
• 分类号: S5
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1006.2009.01445

摘要

从小麦胚乳中克隆了14-3-3基因,并将其分别插入pET29c和pET41c质粒,用热激法转化大肠杆菌BL21-CodonPlus(DE3)-RP,得到高效表达的蛋白,但融合蛋白主要以包涵体的形式存在.可溶性的融合蛋白可直接通过S-蛋白琼脂糖树脂纯化.包涵体经8 mol L-尿素溶解变性,稀释复性后,结合到S-蛋白琼脂糖树脂上,也得到纯化的融合蛋白.复性后的融合蛋白对蔗糖合酶活性表现抑制作用,说明包涵体14-3-3融合蛋白恢复活性.将结合14-3-3融合蛋白的S-蛋白琼脂糖树脂作为诱饵与小麦胚乳淀粉体提取液进行亲和杂交,与14-3-3蛋白特异互作的淀粉合成酶结合到S-蛋白琼脂糖树脂上,Western 检测结果表明,淀粉体淀粉合酶Ⅰ(SSⅠ)、淀粉合酶Ⅱ(SSⅡ)、淀粉分支酶Iia(SBEⅡa)、淀粉分支酶Iib(SBEⅡb)和ADP焦磷酸化酶大亚基(SH2)与14-3-3蛋白存在互作,而淀粉分支酶Ⅰ(SBEⅠ)、淀粉磷酸化酶(SP)、D-酶(DE)和ADP焦磷酸化酶小亚基(BT2)不能与14-3-3蛋白结合,说明小麦胚乳14-3-3蛋白对淀粉体淀粉合成具有一定的调控作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	程敦公	山东省农业科学院作物研究所	39	294	9.0	15.0
2	宋健民	山东省农业科学院作物研究所	29	377	10.0	18.0
3	戴双	山东省农业科学院作物研究所	33	386	9.0	19.0
4	李豪圣	山东省农业科学院作物研究所	43	639	13.0	24.0
5	刘爱峰	山东省农业科学院作物研究所	55	1830	21.0	42.0
6	楚秀生	山东省农业科学院作物研究所	34	315	9.0	15.0