小鼠HIF-1α基因干扰质粒的构建及其体外抑制效果研究

• 作者: 丁震宇 常智杰 星懿展 李泽桂 李红丽 纪华
• 来源期刊: 神经科学通报（英文版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 低氧诱导因子-1α RNA干扰 pBS/U6/HIF-1α-siRNA 小鼠
• 年，卷（期）: 2009,（3）
• 页码范围: 122-130
• 页数: 9页
• 分类号: Q7
• 语种: 英文
• DOI: 10.1007/s12264-009-8122-8

摘要

目的 构建特异的靶向小鼠HIF-1α基因的RNA干扰质粒,检测其对HIF-1α表达的特异性和有效性.方法 用双酶切方法构建了三组靶向小鼠HIF-1α基因的特异性RNA干扰质粒,pBS/U6/HIF-1α-siRNAI～III.采用RT-PCR、免疫细胞化学染色和western blotting分别检测了转染三组干扰质粒对293T细胞内HIF-1α表达的影响.检测了pBS/U6/HIF1αi-II质粒对SH-SY5Y细胞中HIF-1α表达的量效干扰效应.结果 三组RNA干扰质粒均可显著降低293T细胞中HIF-1α的表达,尤以pBS/U6/HIF1αi-II质粒的干扰效果最佳.验证了pBS/U6/HIF1αi-II质粒对SH-SY5Y细胞系中HIF-1α的表达存在剂量效应关系.结论 本实验构建的pBS/U6/HIF1αi-Ⅱ干扰质粒能有效特异地抑制HIF-1α的表达,其在神经管发育和神经管缺陷中的作用将被进一步探讨.pBS/U6/HIF1αi-II的构建还为探讨HIF-1途径在胚胎发育、肿瘤发生和缺血性疾病中的作用提供了有用的研究工具.