仙台病毒BB1株6个编码基因的克隆及表达

• 作者: 吴小兵 张海凤 杨宇 董小岩
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 医学
• 关键词: 副粘病毒科 仙台病毒 BB1株 腺病毒载体
• 年，卷（期）: 2009,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 213-219
• 页数: 7页
• 分类号: R373.9
• 语种: 中文

摘要

在仙台病毒BB1株全基因组序列测定的基础上,用反转录和PCR方法获得了核蛋白基因(N),磷蛋白基因(P),神经血凝素基因(HN),基质蛋白基因(M)、融合蛋白基因(F)和聚合酶蛋白基因(L)等6个编码基因全长克隆;测序结果表明,其序列与Genbank中登录的序列(DQ219803)完全一致.为了提供仙台病毒基因组载体拯救和包装所需的反式作用蛋白,将N、P、M、F、HN和L分别克隆到腺病毒穿梭表达载体pDC316上,将它们分别与腺病毒基因组质粒pBHGlox△E1,3Cre共转染HEK293细胞,获得了6种复制缺陷性重组腺病毒Ad5-N、Ad5-P、Ad5-M、Ad5-F、Ad5-HN和Ad5-L,酶切结果表明6种重组腺病毒穿梭质粒构建正确;用PCR方法证明所获得的6种重组腺病毒分别携带了上述6个编码基因;用重组腺病毒感染LLC-MK2细胞后用Western blotting和免疫荧光方法检测到了相应仙台病毒编码基因的表达.本研究为仙台病毒BB1株全长基因组的拼接和病毒载体包装系统组建打下了基础.