牛病毒性腹泻病毒玛纳斯株E2基因的克隆及其主要抗原表位区的分段表达

• 作者: 王新华 钟发刚 黄新
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 牛病毒性腹泻病毒 E2基因 克隆 抗原表位 表达
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 321-326
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.6|Q786
• 字数: 5858字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2009.04.008

摘要

应用RT-PCR方法扩增了牛病毒性腹泻病毒(BVDV)新疆玛纳斯分离株的E2基因,应用软件对序列进行分析,预测了可能存在的抗原表位;分别扩增了包含预测抗原位点的片段(1～118)-(144～340)-(100～300)-(1～345),并将其克隆到pMD18-T Simple载体中;将重组质粒pMD-(1～118)、pMD-(144～340)、pMD-(100～300)、pMD-(1～345)的HindⅢ+Bam H Ⅰ双酶切产物分别插入pET28a(+),构建了原核表达载体pET-(1～118)、pET-(144～340)、pET-(100～300)、pET-(1～345).将这些原核表达载体分别导入BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,收集菌液进行SDS-PAGE分析,结果显示,4个重组质粒在BL21(DE3)中均成功表达,表达融合蛋白的分子质量分别为18.6、28.2、29.2和43.9 ku,与预测蛋白质分子质量一致,Western-blot分析结果表明,28.2、29.2和43.9 ku的融合蛋白可被牛抗BVDV阳性血清识别.