牛乳中金黄色葡萄球菌山东分离株(zfb)β-溶血素(h/b)的克隆、表达及溶血活性分析

• 作者: 仲跻峰 彭广能 杨宏军 杨少华 杨钦 王长法 高运东
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 金黄色葡萄球菌 β-溶血素 克隆 表达 溶血活性 CAMP反应
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 兽医
• 页码范围: 324-330
• 页数: 7页
• 分类号: S8
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2009.01.042

摘要

[目的]实现牛乳中金黄色葡萄球菌β-溶血素在大肠杆菌中的高效表达,并分析重组β-溶血素的溶血活性.[方法]PCR扩增牛乳中金黄色葡萄球菌山东分离株β-溶血素基因,构建原核表达载体pET32a+/hlb,并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,用96孔血凝板测定重组蛋白的溶血效价,以血琼脂平板法检测重组蛋白的CAMP反应.[结果]测序结果表明,扩增片段含有993 bp的ORF,可编码含330个氨基酸的成熟蛋白;SDS-PAGE分析重组蛋白表达水平,IPTG诱导后表达的融合蛋白分子量为57 kD,表达量占菌体总蛋白的23.9%;溶血效价分析,金葡菌β-溶血素对绵羊红细胞的溶血效价为278 HU·mg-1,对奶牛红细胞的溶血效价为9×103Hu·mg-1;重组蛋白在血琼脂平板上和无乳链球菌能发生明显的CAMP反应.[结论]成功表达了牛乳中金黄色葡萄球菌β-溶血素,该毒素对奶牛红细胞的溶血活性明显大于绵羊红细胞,显示出牛源金黄色葡萄球菌β-溶血素的特性明显不同于人源金黄色葡萄球菌β-溶血素,为进一步研究其致病与免疫机理、疫苗设计提供了理论基础.此外,重组蛋白还可用来特异性诊断、鉴别无乳链球菌,为兽医临床诊断提供新的方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨钦	山东省农业科学院奶牛研究中心	3	11	1.0	3.0
4	王长法	山东省农业科学院奶牛研究中心	107	675	13.0	18.0
5	仲跻峰	山东省农业科学院奶牛研究中心	137	888	15.0	20.0
6	高运东	山东省农业科学院奶牛研究中心	72	515	12.0	18.0
10	杨宏军	山东省农业科学院奶牛研究中心	52	203	9.0	11.0
11	杨少华	山东省农业科学院奶牛研究中心	48	391	12.0	17.0