利用酿酒酵母表达氯化钠胁迫下旱柳全长cDNA文库

• 作者: 乔桂荣 何正权 卓仁英 周婧 李海营 杨晔 蒋晶 陈银
• 来源期刊: 浙江农林大学学报
• 关键词: 植物学 旱柳 cDNA文库 耐盐性 酵母 抗旱相关基因
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 页码范围: 473-478
• 页数: 6页
• 分类号: S718.43|Q789
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-0756.2009.04.004

摘要

为了研究旱柳Salix matsudana高耐盐无性系I-32的耐盐机制,分离其耐盐相关基因,实验以筛选出的高耐盐旱柳无性系I-32为材料,盐胁迫后提取总核糖核酸(RNA),纯化mRNA,利用改良SMART(switching mechanism at 5'end of RNA transcript)技术合成了全长cDNA,回收500 bp以上cDNA大片段克隆到大肠杆菌Escherichia coli和酵母穿梭载体pYES2.1中,建成旱柳全长cDNA文库,对随机挑取的阳性克隆进行聚合酶链式反应(PCR)鉴定,插入片断平均值为1 000 bp左右,说明所构建的文库达到了用于目的基因分离筛选和表达的建库要求.通过尿嘧啶缺陷型培养基添加80～130 g·L-1氯化钠筛选文库,与野生型酵母菌株相比,转化子的耐盐能力提高.研究结果为克隆与旱柳抗旱相关基因奠定了基础.