利用烟草的cDNA酵母表达文库筛选镉胁迫相关基因

• 作者: 张美 李静 王晶
• 来源期刊: 河南农业科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 烟草 重金属 镉胁迫 cDNA文库 功能基因
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 所属期刊栏目: 作物栽培·遗传育种
• 页码范围: 46-49
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 2721字
• 语种: 中文

摘要

为了鉴定烟草在重金属镉胁迫处理下的功能基因,构建烟草cDNA酵母表达文库,并利用镉敏感的突变株对文库进行初步筛选.首先将烟草幼苗进行重金属胁迫处理,然后取幼根提取总RNA并纯化mRNA,采用SMART技术反转录成双链cDNA,将cDNA与入门载体pDONR222的同源重组区连接,再转到酵母表达载体pDEST22上,构建了Gateway技术兼容的酵母cDNA表达文库.经检测,构建的cDNA酵母表达文库滴度为4.32×106 cfu/mL,库容量为0.86×107 cfu,平均插入片段长度大于1 kb,文库质量较高.通过镉敏感酵母突变株△ycf1筛选烟草重金属镉胁迫相关基因,获得酵母单克隆70个.经分析可知,其涉及到谷胱甘肽转移酶、铜分子伴侣及甲硫蛋白等24个不同蛋白基因,初步鉴定为烟草应答重金属镉胁迫的候选基因.