蛋白磷酸酶2C(PP2C)的表达、纯化与催化活性

• 作者: 亓晓艳 周旺 张应玖
• 来源期刊: 吉林大学学报(理学版)
• 学科: 生物学
• 关键词: 蛋白磷酸酶2C(PP2C) 表达 纯化 活性
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 生命科学
• 页码范围: 144-149
• 页数: 6页
• 分类号: Q55
• 字数: 4045字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1671-5489.2009.01.031

摘要

从小鼠肌肉组织中提取了总RNA,经RT-PCR,扩增出蛋白磷酸酶2C(PP2C)基因,并构建了pUCm-T载体.经核酸序列分析证明PP2C基因序列正确后,将pUCm-T中的PP2C基因插入pET28a载体中,构建了表达载体pET28a-PP2C,并转化到E.coli BL21(DE3)进行表达.经测定,该菌株表达目的蛋白PP2C的最适条件为:诱导物IPTG的终浓度为0.8 mmol/L,37 ℃,诱导时间为20 h.在此条件下,PP2C实现了高效表达,表达的PP2C蛋白约占菌体总蛋白的18.2%,其中在裂解上清液、沉淀中分别占总蛋白的7.1%和11.1%.经SDS-PAGE分析,表达产物分子量约为42 000.应用Ni-NTA柱实现了可溶性PP2C的纯化,收率达80.5%,纯化的PP2C比活力达34.5 U/mg.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张应玖	吉林大学分子酶学工程教育部重点实验室	44	194	7.0	11.0
2	亓晓艳	吉林大学分子酶学工程教育部重点实验室	3	7	1.0	2.0
3	周旺	吉林大学分子酶学工程教育部重点实验室	2	6	1.0	2.0