猪MSTN前肽定点诱变载体在C2C12细胞中的表达

• 作者: 伍晓雄 唐中林 崔文涛 张晓玮 李奎 杨述林 牟玉莲
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪 MSTN前肽基因 定点诱变 真核表达
• 年，卷（期）: 2009,（11）
• 所属期刊栏目: 遗传繁育
• 页码范围: 1588-1593
• 页数: 6页
• 分类号: S828|Q344.13
• 字数: 4531字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0366-6964.2009.11.003

摘要

本研究旨在克隆通城猪含有第1个内含子的MSTN前肽基因,构建真核定点诱变载体,并通过转染C2C12细胞验证载体表达的有效性.以通城猪血液样品中提取的DNA作为模板,PCR扩增得到含第1个内含子的MSTN前肽基因,扩增产物进行克隆、测序.再将目的片段定向克隆到去除了EGFP基因的pEGFP-N1表达载体上.通过定点诱变方法将前肽编码序列第76位天冬氨酸突变为丙氨酸,获得定点诱变载体pEGFP(-)-N1-ProMstnD76A,并瞬时转染C2C12细胞.转染48 h后,通过RT-PCR和Real-time PCR方法检测目的基因的表达情况.结果表明:本研究成功克隆了通城猪含第1个内含子的MSTN前肽基因,并对该基因进行定点诱变修饰,构建了真核表达载体,转染后其前体mRNA能在C2C12细胞中进行正确剪接,目的基因mRNA表达水平较高.这为猪MSTN前肽基因在体内表达的研究奠定基础,并为制备转基因猪提供有用的分子材料.