猪肌肉生长抑制素(MSTN)前肽定点突变载体的构建及其原核表达

• 作者: 姜声旺 崔文涛 张晓玮 李奎 王在贵
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪 肌肉生长抑制素 前肽 突变 原核表达
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 389-396
• 分类号: S852.2
• 字数: 6073字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2012.04.007

摘要

肌肉生长抑制素(MSTN)能够限制肌纤维的增粗增大,而突变的肌肉生长抑制素前肽(Pro-MSTN-D75A)能阻止MSTN与相应受体的结合,从而解除MSTN对肌纤维的抑制作用.猪是我国最重要的肉用家畜,通过操作MSTN提高其瘦肉产量,将对我国生猪生产具有特殊意义.本研究用通城猪妊娠3个月的胚胎为材料,提取背最长肌RNA并以此为模板,用反转录PCR扩增猪MSTN前肽cDNA序列(不含信号肽),并将其连接到原核表达载体pGEX-6p-1上.通过定点突变将编码天冬氨酸的密码子变为内氨酸密码子(D75A),构建了原核表达载体pGEX-ProM(SP-)和pGEX-ProM(SP-)D75A.重组质粒转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21感受态细胞并经IPTG诱导表达,结果表明,转化pGEX-ProM(SP-)质粒的E.coli BL21工程菌用终浓度为0.6 mmol/L的IPTG诱导5h表达情况最好；而转化pGEX-ProM(SP-)D75A的工程菌在1 mmol/L的IPTG诱导6h的条件下表达情况最好.用GST-Trap蛋白纯化系统纯化回收总分子量大小约为51kD融合蛋白(GST蛋白标签分子量为26 kD,MSTN前肽蛋白分子量为25 kD).纯化蛋白的浓度ProM(-SP)为1.87 mg/mL,ProM(-SP)D75A为1.21 mg/mL.本研究建立了大肠杆菌表达猪MSTN前肽的最佳条件,提高了生产效率,并为研究MSTN前肽在动物体内的生物学功能以及制备单克隆抗体提供基础资料.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李奎	中国农业科学院北京畜牧兽医研究所	73	382	11.0	16.0
2	王在贵	安徽农业大学生命科学学院	43	230	9.0	12.0
3	崔文涛	中国农业科学院北京畜牧兽医研究所	14	66	6.0	7.0
4	姜声旺	安徽农业大学生命科学学院	1	2	1.0	1.0
8	张晓玮	中国农业科学院北京畜牧兽医研究所	1	2	1.0	1.0