兔抗大鼠LM23蛋白合成肽多克隆抗体的制备与初步应用

• 作者: 刘美玲 成毅明 王介东 石心泉 贾孟春
• 来源期刊: 生殖医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: LM23 合成肽 精子发生 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2009,（3）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 279-283
• 页数: 5页
• 分类号: R9
• 字数: 3763字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-3845.2009.03.029

摘要

目的 制备大鼠精子发生相关蛋白LM23的合成肽多克隆抗体, 对其特性进行初步鉴定,并对LM23多克隆抗体进行初步应用. 方法 利用生物信息学方法分析选择LM23蛋白的多肽序列.应用Fmoc法化学合成大鼠LM23蛋白N端第1～20和第274～291个氨基酸多肽(接近C端), 经C18的RP-HPLC纯化后, 通过高碘酸钠法,将纯化的LM23蛋白的多肽与KLH交联,免疫新西兰大耳白兔,获得LM23蛋白的多克隆抗体.用ELISA方法鉴定多克隆抗体效价.通过Western blot方法鉴定LM23多克隆抗体的特异性并研究LM23在大鼠睾丸中的表达;通过免疫组化方法研究LM23在大鼠睾丸组织和细胞中的定位. 结果 化学Fmoc法分别合成大鼠LM23蛋白N端第1～20,第274～291个氨基酸多肽, 纯化后两条多肽纯度都达到90%以上, 符合免疫用抗原标准.将多肽与KLH交联, 用于免疫动物.经ELISA鉴定,两种多克隆抗体的效价分别达到1∶64 000 和 1∶128 000.应用大鼠睾丸组织切片进行LM23-18肽多克隆抗体的免疫组织化学研究,发现精母细胞有阳性颗粒反应,且LM23主要表达于细胞核. Western blot 研究证实,LM23-18肽多克隆抗体可特异识别大鼠睾丸组织中相对分子量(Mr)约为36 kD的LM23蛋白. 结论 所制备的LM23合成肽多克隆抗体可用于ELISA、Western blot及免疫组化研究.LM23合成肽多克隆抗体的制备为进一步研究LM23的功能和作用机制提供了有力支持.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	贾孟春		18	78	5.0	8.0
2	王介东		50	320	10.0	16.0
3	刘美玲		8	50	3.0	7.0
4	石心泉		8	23	3.0	4.0
5	成毅明		2	5	2.0	2.0