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摘要:
目的 制备大鼠精子发生相关蛋白LM23的合成肽多克隆抗体, 对其特性进行初步鉴定,并对LM23多克隆抗体进行初步应用. 方法 利用生物信息学方法分析选择LM23蛋白的多肽序列.应用Fmoc法化学合成大鼠LM23蛋白N端第1~20和第274~291个氨基酸多肽(接近C端), 经C18的RP-HPLC纯化后, 通过高碘酸钠法,将纯化的LM23蛋白的多肽与KLH交联,免疫新西兰大耳白兔,获得LM23蛋白的多克隆抗体.用ELISA方法鉴定多克隆抗体效价.通过Western blot方法鉴定LM23多克隆抗体的特异性并研究LM23在大鼠睾丸中的表达;通过免疫组化方法研究LM23在大鼠睾丸组织和细胞中的定位. 结果 化学Fmoc法分别合成大鼠LM23蛋白N端第1~20,第274~291个氨基酸多肽, 纯化后两条多肽纯度都达到90%以上, 符合免疫用抗原标准.将多肽与KLH交联, 用于免疫动物.经ELISA鉴定,两种多克隆抗体的效价分别达到1∶64 000 和 1∶128 000.应用大鼠睾丸组织切片进行LM23-18肽多克隆抗体的免疫组织化学研究,发现精母细胞有阳性颗粒反应,且LM23主要表达于细胞核. Western blot 研究证实,LM23-18肽多克隆抗体可特异识别大鼠睾丸组织中相对分子量(Mr)约为36 kD的LM23蛋白. 结论 所制备的LM23合成肽多克隆抗体可用于ELISA、Western blot及免疫组化研究.LM23合成肽多克隆抗体的制备为进一步研究LM23的功能和作用机制提供了有力支持.
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内容分析
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文献信息
篇名 兔抗大鼠LM23蛋白合成肽多克隆抗体的制备与初步应用
来源期刊 生殖医学杂志 学科 医学
关键词 LM23 合成肽 精子发生 多克隆抗体
年,卷(期) 2009,(3) 所属期刊栏目 实验研究
研究方向 页码范围 279-283
页数 5页 分类号 R9
字数 3763字 语种 中文
DOI 10.3969/j.issn.1004-3845.2009.03.029
五维指标
作者信息
序号 姓名 单位 发文数 被引次数 H指数 G指数
1 贾孟春 18 78 5.0 8.0
2 王介东 50 320 10.0 16.0
3 刘美玲 8 50 3.0 7.0
4 石心泉 8 23 3.0 4.0
5 成毅明 2 5 2.0 2.0
传播情况
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研究主题发展历程
节点文献
LM23
合成肽
精子发生
多克隆抗体
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
生殖医学杂志
月刊
1004-3845
11-4645/R
大16开
北京市帅府园1号
80-419
1992
chi
出版文献量(篇)
4211
总下载数(次)
9
总被引数(次)
22615
相关基金
国家自然科学基金
英文译名:the National Natural Science Foundation of China
官方网址:http://www.nsfc.gov.cn/
项目类型:青年科学基金项目(面上项目)
学科类型:数理科学
论文1v1指导