可调控CYP 4A1的逆转录病毒重组质粒的构建与鉴定

• 作者: 周赤燕 汪炳华 秦欢 黄丽丽
• 来源期刊: 武汉大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 细胞色素P450 CYP 4A1 TA克隆 荧光定量检测 Tet-on诱导表达系统
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 1-5,37
• 页数: 6页
• 分类号: R543.1
• 语种: 中文

摘要

目的:运用分子生物学技术克隆CYP 4A1全长cDNA基因,进一步构建可由强力霉素诱导表达CYP4A1的逆转录病毒重组质粒.方法:运用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从大鼠肝组织中扩增出CYP 4A1全长基因,克隆至pMD18-T载体,将构建正确的pMD18-CYP 4A1质粒采用双酶切亚克隆到逆转录病毒载体载体pRevTRE中,采用酶切反应、PCR鉴定和序列测定鉴定重组逆转录病毒载体pRevTRE/CYP 4A1;在脂质体介导下分别将质粒pRevTRE/CYP 4A1与逆转录病毒四环素调节质粒pRevTet-on转染至包装细胞PT67,分别经抗性筛选获得稳定产生病毒的包装细胞系后收集转染后的细胞上清.用荧光定量PCR测定病毒滴度.结果:经酶切鉴定、PCR鉴定和序列测定证实成功构建了pRevTRE/CYP 4A1逆转录病毒重组质粒;转染pRevTet-on的PT67细胞病毒滴度为7.2×1010copies/L,转染pRevTRE/CYP 4A1的PT67细胞病毒滴度为5.46×109copies/L.结论:成功构建了含四环素调控CYP 4A1基因的逆转录病毒重组质粒,建立了能产较高滴度逆转录病毒的包装细胞系,为CYP 4A1基因功能及其相关疾病的研究打下实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	汪炳华	武汉大学医学院生物化学与分子生物学系	28	125	7.0	10.0
2	周赤燕	武汉大学医学院生物化学与分子生物学系	2	15	1.0	2.0
3	黄丽丽	武汉大学医学院生物化学与分子生物学系	8	11	1.0	3.0
4	秦欢	武汉大学医学院生物化学与分子生物学系	6	16	2.0	4.0