巴斯德毕赤酵母表达系统中甘油阻遏相关基因GR1的分离克隆与鉴定

• 作者: 何庆 刘志敏 姚学勤 孙博 薛冲 赵洪亮
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 巴斯德毕赤酵母 甘油阻遏 限制酶介导整合技术 TAII-PcR
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 462-466
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 4724字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2009.04.003

摘要

目的:分离克隆并鉴定巴斯德毕赤酵母表达系统中甘油阻遏相关基因.方法:PCR扩增LacZ基因,克隆至pPIC9载体,构建pPIC9-LacZ表达载体,经Sal I线性化后转化巴斯德毕赤酵母GSll5,构建GSll5-LacZ模式菌株;用限制酶介导整合(REMl)技术使GSll5-LacZ菌体基因组产生随机突变,筛选甘油去阻遏的GSll5-LacZA茵体;Southem blot鉴定GSll5-LacZA基因组.用质粒拯救技术和TAIL-PCR克隆未知基因序列并测序.结果:得到甘油去阻遏的GSll5-LacZA茵体,经Southern blot分析,突变仅发生在1个基因中;通过质粒拯救和TAIL-PCR,分离得到阻遏相关基因GR1,共2 863bp,经在线BLAST,发现其编码一种过氧化物酶体自吞噬相关蛋白.结论:分离得到阻遏相关基因GRI,与过氧化物酶体自吞噬相关,提示过氧化物酶体自吞噬相关基因可能对醇氧化酶启动子AOXl的转录活性有影响.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙博	军事医学科学院生物工程研究所	7	44	3.0	6.0
2	刘志敏	军事医学科学院生物工程研究所	55	823	12.0	28.0
3	赵洪亮	军事医学科学院生物工程研究所	23	169	7.0	12.0
4	薛冲	军事医学科学院生物工程研究所	31	231	7.0	14.0
5	何庆	军事医学科学院生物工程研究所	3	2	1.0	1.0
6	姚学勤	军事医学科学院生物工程研究所	5	10	2.0	3.0