酸敏感离子通道基因重组质粒的构建、表达及其活性测定

• 作者: 苏敬敬 董强
• 来源期刊: 神经解剖学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 酸敏感离子通道 重组质粒 表达 生物学活性 小鼠
• 年，卷（期）: 2009,（6）
• 所属期刊栏目: 原著
• 页码范围: 595-601
• 页数: 7页
• 分类号: R3
• 语种: 中文

摘要

为了构建含有小鼠酸敏感离子通道(ASIC1a、ASIC2a)基因全长eDNA的重组质粒,并表达有生物学活性的ASIC1a和ASIC2a融合蛋白,本研究通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别获得小鼠ASIC1a和ASIC2a全长cDNA,并将其克隆人真核表达载体pEGFP-N3中,构建含小鼠全长ASIC1a和ASIC2a基因的重组质粒pEGFP-ASIC1a和pEGFP-ASIC2a,经DNA测序鉴定序列正确.脂质体法分别将其转染至中国仓鼠卵巢细胞(CHO),荧光显微镜下观察小鼠ASIC1a和ASIC2a融合蛋白在细胞内的表达分布,Western blot检测其蛋白表达.酸性处理转染重组质粒细胞,并比较其细胞存活率及乳酸脱氢酶(LDH)的释放来评价融合蛋白的生物学活性.结果显示:本研究成功地分别将小鼠ASIC1a和ASIC2a全长eDNA克降入pEGFP-N3载体中,并将其转染至CHO细胞,荧光显微镜下观察到CHO细胞膜周围呈强绿色荧光条带,Western blot显示小鼠ASIC1a和ASIC2a融合蛋白分别在90 kD和88 kD处有表达.经酸性处理的转染ASIC1a和ASIC2a重组质粒的CHO细胞,分别较其在pH7.4条件下的细胞存活率明显降低,LDH释放量明显增高,且通道阻断剂可抑制该效应.上述结果提示,我们已成功构建出含小鼠ASIC1a和ASIC2a全长cDNA的重组质粒pEGFP-ASIC1a和pEGFP-ASIC2a,并使有生物学活性的ASIC1a和ASIC2a融合蛋白在CHO细胞中表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	董强	复旦大学附属华山医院神经内科	176	1321	18.0	27.0
2	苏敬敬	复旦大学附属华山医院神经内科	4	13	1.0	3.0