SYBR Green Ⅰ Real time PCR检测胃癌组织中LIN28基因方法的建立

• 作者: 周红梅
• 来源期刊: 现代检验医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: SybrGreenI实时荧光定量PCR RNA连接蛋白LIN28 逆转录聚合酶链反应 引物二聚体 胃癌组织
• 年，卷（期）: 2009,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 27-31
• 页数: 5页
• 分类号: R730.45
• 字数: 4152字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7414.2009.06.012

摘要

目的 建立SYBR Green Ⅰ荧光染料实时定量PCR方法,测定LIN28基因在胃癌组织中的表达水平,并进行实验室方法学评价.方法 采用RT-PCR扩增LIN28 基因片段 ,将该片段克隆到质粒载体PMD18-T上, 转化入大肠埃希氏菌(DH5a)中,PCR鉴定后,提取重组质粒,以阳性质粒为模板,建立SYBR-Green I荧光定量PCR标准曲线,以β-actin为内参,运用Rotor-Gene 6000series software做相对定量分析,检测30例胃癌患者的癌组织中LIN28的表达水平.结果 用重组质粒制作的标准曲线循环阈值与模板浓度有良好的线性关系,内参β-actin和LIN28标准曲线相关系数分别为0.999 7和0.999 1,其最低的检测拷贝数为1,LIN28溶解曲线呈单个特异峰.结论 成功地构建了LIN28的原核表达载体.建立的SYBR Green Ⅰ荧光染料实时定量PCR法特异度、敏感度高,稳定性好,可用于定量测定胃癌组织中LIN28的表达水平.