谷氨酰胺:6-磷酸果糖酰胺基转移酶多克隆抗体的制备及应用

• 作者: 刘倩 叶菲 田金英 金晶
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 医学
• 关键词: 谷氨酰胺 6-磷酸果糖酰胺基转移酶 原核蛋白表达 抗体制备 糖尿病
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 470-474
• 页数: 5页
• 分类号: Q78|R392.1
• 字数: 3793字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2009.04.005

摘要

目的:采用原核表达系统表达和纯化重组谷氨酰胺:6-磷酸果糖酰胺基转移酶(GFAT),制备GFAT多克隆抗体,并用以研究在糖尿病发生发展过程中GFAT的表达情况.方法:通过生物信息学分析其抗原性和属间同源性,选择需要的基因区域;利用RT-PCR扩增小鼠肝脏cDNA中GFAT基因片段,克隆到表达载体pET28b中;在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,并用镍高子螯合柱(Ni-NTA)纯化重组GFAT;用纯化的重组GFAT免疫BALB/c小鼠后得到多克隆抗体;用Western印迹检测正常小鼠、高血糖小鼠及胰岛素抵抗小鼠的组织GFAT的表达.结果:Western印迹分析表明,制备的GFAT抗体具有较高的特异性,可特异性识别重组GFAT和正常小鼠肝脏、肾脏、骨骼肌和肺组织的GFAT;与正常小鼠相比,高脂饲料诱导的胰岛素抵抗小鼠肌肉组织的GFAT表达升高约1.8倍.肝脏组织则略有升高;高血糖小鼠肌肉组织和肝脏组织的GFAT表达也略有上升,但无统计学差异.结论:利用原核表达及Ni-NTA纯化系统可制备小鼠GFAT多克隆抗体;正常小鼠骨骼肌GFAT表达较高;肌肉组织的GFAT表达在胰岛素抵抗小鼠显著性升高,而与小鼠血糖水平无明显相关性.