蛋白质谷氨酰胺酶成熟肽基因mpg原核表达及其多克隆抗体的制备

• 作者: 刘英杰 曲瑞丹 林青楠 田敏 陈浩喆 黄静
• 来源期刊: 工业微生物
• 关键词: 蛋白质谷氨酰胺酶 原核表达 多克隆抗体 免疫学检测
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 研究与应用
• 页码范围: 1-8
• 页数: 8页
• 字数: 4818字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-6678.2019.05.001

摘要

蛋白质谷氨酰胺酶(Protein-glutaminase,简称PG)是一种新型蛋白质脱酰胺酶,在蛋白质改性领域具有广阔的应用前景.但是,目前关于蛋白质谷氨酰胺酶的测定方法主要是通过苯酚-次氯酸盐反应测定铵离子含量指示蛋白质谷氨酰胺酶的酶活,该方法精确度和灵敏度有限.因此,利用原核表达系统表达解朊金黄杆菌(Chryseobacterium proteolyticum)分泌的蛋白质谷氨酰胺酶成熟肽基因mpg,纯化后制备其多克隆抗体用于检测解朊金黄杆菌分泌的蛋白质谷氨酰胺酶的含量.首先以解朊金黄杆菌基因组为模板扩增出成熟肽基因mpg,将其与pET32a载体连接构建重组质粒pET32a-mpg,转化至大肠杆菌BL21(DE3).在25℃条件下,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导6h,目的蛋白表达量最高、呈可溶性蛋白.通过Ni-NTA柱纯化的重组蛋白mPG-His6,将其作为抗原,免疫新西兰白兔制备多克隆抗体.间接酶联免疫法检测其效价,所得抗体效价为1∶5 000.蛋白质免疫印迹实验结果说明,该多克隆抗体特异性良好.最后使用该多克隆抗体对解朊金黄杆菌的发酵上清液进行蛋白质免疫印迹反应,检测天然蛋白质谷氨酰胺酶,结果表明该抗体特异性良好,可用于检测解朊金黄杆菌分泌的蛋白质谷氨酰胺酶,为深入研究蛋白质谷氨酰胺酶的生物学功能、建立蛋白质谷氨酰胺酶高产菌株的高通量筛选方法奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄静	华东师范大学生命科学学院	63	532	10.0	21.0
2	林青楠	华东师范大学生命科学学院	2	0	0.0	0.0
3	田敏	华东师范大学生命科学学院	2	0	0.0	0.0
4	曲瑞丹	华东师范大学生命科学学院	2	0	0.0	0.0
5	刘英杰	华东师范大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0