重组小鼠14-3-3蛋白theta亚型的构建

• 作者: 倪红霞 张媛 张雷 王尔孚 陈立梅
• 来源期刊: 北华大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 小鼠脑 14-3-3蛋白质 原核表达载体 基因重组蛋白
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 生物科学·基础医学
• 页码范围: 314-318
• 页数: 5页
• 分类号: Q591.2
• 字数: 3838字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-4822.2009.04.007

摘要

目的 克隆编码14-3-3蛋白质θ亚型的cDNA,制备该蛋白质的基因重组蛋白质.方法 参照小鼠14-3-3蛋白质θ亚型mRNA结构设计引物,以小鼠脑总RNA为模板,RT-PCR法克隆编码14-3-3蛋白质θ亚型的cDNA,插入原核表达质粒pGEX-4T-1,转化大肠杆菌BL21(DE3)使其表达谷胱甘肽S转移酶(GST)为标签的融合蛋白质,以凝血酶定点分解融合蛋白并采用Glutathione Sepharose 4B亲和层析纯化目的 蛋白.结果 RT-PCR扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳分离可见约800 bp条带,序列分析表明重组质粒pGEX-1433theta中的插入子为738 bp,编码245个氨基酸,其核苷酸及氨基酸序列与Pubmed NM-011739展示的结果一致.重组质粒pGEX-1433theta在BL21(DE3)中的表达量随IPTG诱导时间递增,融合蛋白质为可溶性组分.亲和层析纯化的14-3-3theta在SDS-PAGE上表现为单一条带,表观相对分子质量为30 ku.每L培养菌液可收获4mg基因重组型小鼠14-3-3theta.结论 克隆了编码小鼠14-3-3蛋白质θ亚型的cDNA,制备了高纯度基因重组型小鼠14-3-3theta,为进行单克隆抗体的制备奠定了坚实的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张媛	北华大学基础医学院	13	32	3.0	5.0
2	张雷	北华大学基础医学院	14	33	4.0	5.0
3	陈立梅	北华大学基础医学院	12	50	5.0	6.0
4	王尔孚	北华大学基础医学院	7	21	2.0	4.0
5	倪红霞	北华大学基础医学院	14	99	5.0	9.0