GST/HIF-1α(融合蛋白表达载体的构建及其在大肠埃希菌中的表达

• 作者: 佟宇鑫 李丰 李丹妮 李妍 邵阳光
• 来源期刊: 中国医科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 缺氧诱导因子1α 截短突变体 质粒 原核表达
• 年，卷（期）: 2009,（10）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 721-723,729
• 页数: 4页
• 分类号: Q257
• 字数: 2665字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建GST/HIF-1α融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌(E.coli)中诱导表达.方法 以质粒pcDNA3.1-HIF-1α为模板,用PCR法扩增HIF-1α全长及各个截短片段,通过BamHI和Not I酶切位点将HIF-1α全长及各个截短突变体定向插入pGEx-4T-2中,构建原核表达质粒pGEX-4T-2-HIF-1α及其截短突变体,并转化E.coli DH5α,筛选阳性重组子,限制性内切酶酶切鉴定和DNA序列测定正确后,转入E.coli BL21中,异丙基硫代β-D半乳糖苷诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定.结果 酶切及测序结果证明,成功构建了原核表达质粒pGEX-4T-2-HIF-1α及其截短突变体,并用Western blot方法证实了GST/HIF-1α全长及各个截短突变体融合蛋白的表达.结论 成功构建了HIF-1α原核表达载体及其截短突变体,并证实了融合蛋白的表达,为进一步纯化HIF-1α蛋白和研究HIF-1α的生物学功能奠定了基础.