GST/RIPX融合蛋白表达载体的构建及其在大肠埃希菌中的表达

• 作者: 王孝会 王桂玲
• 来源期刊: 中国医科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 质粒 原核表达 融合蛋白 RIPX
• 年，卷（期）: 2010,（12）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 987-988,994
• 分类号: Q257
• 字数: 1718字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建GST/RIPX融合蛋白基因表达载体,并在大肠埃希菌(E.coli)中诱导表达.方法 以质粒pcDNA3.1.RIPX为模板,通过BamH1和Xho1酶切位点将RIPX定向插入pGEX-4T-2中,构建原核表达质粒pGEX-4T-2-RIPX,并转化E.coil DH5а,筛选阳性重组子,限制性内切酶酶切鉴定和DNA序列测定正确后,转入化E.eoli BL21中,异丙基硫代β-D半乳糖苷诱导表达.鉴定.结果 酶切及测序结果证明,成功构建了原核表达质粒pGEX-4T-2-RIPX,并用SDS-PAGE方法证实了GST/RIPX融合蛋白的表达.结论 成功构建了RIPX原核表达载体,并证实了融合蛋白的表达,为进一步纯化RIPX蛋白和研究RIPX的生物学功能奠定了基础.